| 產品名稱 |
ZR-75-1+luc |
| 商品貨號 |
MZ-0606 |
| 中文名稱 |
人乳腺癌細胞（熒光素酶標記） |
| 組織來源 |
女 乳腺癌 |
| 形態特征 |
上皮細胞樣 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 特征特性 |
該細胞為穩定轉染Luc的細胞，隨細胞傳代次數的增加，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。 建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。 初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養基維持培養，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養基培養，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養基正常培養。 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養條件 |
準備RPMI-1640（含NaHCO3 ?1.5g/L）培養基，優質胎牛血清10%；P/S 1% |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 |
